Рембрандт. «Урок анатомии доктора ван Тульпа» (1632)

Тот факт, что сам Шерлок Холмс, будучи судебным химиком и исполнявший обязанности химика больничной лаборатории, проводил также исследования и в области судебной медицины, не вызывает никакого сомнения. Об этом свидетельствует знакомство Шерлока Холмса с доктором Уотсоном в повести «Этюд в багровых тонах».

Очень правдиво описано рабочее место Шерлока Холмса в больничной лаборатории. Лаборатории всегда располагались в отдельных зданиях на территориях больниц, эта тенденция сохраняется и до настоящих дней:

«Мы свернули в узкий закоулок двора и через маленькую дверь вошли во флигель, примыкающий к огромному больничному зданию. Здесь все было знакомо, и мне не нужно было указывать дорогу, когда мы поднялись по темноватой каменной лестнице и пошли по длинному коридору вдоль бесконечных выбеленных стен с коричневыми дверями по обе стороны. Почти в самом конце в сторону отходил низенький сводчатый коридорчик – он вел в химическую лабораторию.

В этой высокой комнате на полках и где попало поблескивали бесчисленные бутыли и пузырьки. Всюду стояли низкие широкие столы, густо уставленные ретортами, пробирками и бунзеновскими горелками с трепещущими язычками синего пламени. Лаборатория пустовала, и лишь в дальнем углу, пригнувшись к столу, с чем-то сосредоточенно возился какой-то молодой человек. Услышав наши шаги, он оглянулся и вскочил с места.

– Нашел! Нашел! – ликующе крикнул он, бросившись к нам с пробиркой в руках. – Я нашел наконец реактив, который осаждается только гемоглобином и ничем другим! – Если бы он нашел золотые россыпи, и то, наверное, его лицо не сияло бы таким восторгом.

– Доктор Уотсон, мистер Шерлок Холмс, – представил нас друг другу Стэмфорд.

– Здравствуйте! – приветливо сказал Холмс, пожимая мне руку с силой, которую я не мог в нем заподозрить. – Я вижу, вы жили в Афганистане.

– Как вы догадались? – изумился я.

– Ну, это пустяки, – бросил он, усмехнувшись. – Вот гемоглобин – это другое дело. Вы, разумеется, понимаете важность моего открытия?

– Как химическая реакция – это, конечно, интересно, – ответил я, – но практически…

– Господи, да это же самое практически важное открытие для судебной медицины за десятки лет. Разве вы не понимаете, что это дает возможность безошибочно определять кровяные пятна? Подите-ка, подите сюда! – В пылу нетерпения он схватил меня за рукав и потащил к своему столу. – Возьмите немножко свежей крови, – сказал он и, уколов длинной иголкой свой палец, вытянул пипеткой капельку крови. – Теперь я растворю эту каплю в литре воды. Глядите, вода кажется совершенно чистой. Соотношение количества крови к воде не больше, чем один к миллиону. И все-таки, ручаюсь, что мы получим характерную реакцию. – Он бросил в стеклянную банку несколько белых кристалликов и накапал туда какой-то бесцветной жидкости. Содержимое банки мгновенно окрасилось в мутно-багровый цвет, а на дне появился коричневый осадок.

– Ха, ха! – он захлопал в ладоши, сияя от радости, как ребенок, получивший новую игрушку. – Что вы об этом думаете?

– Это, по-видимому, какой-то очень сильный реактив, – заметил я.

– Чудесный! Чудесный! Прежний способ с гваяковой смолой очень громоздок и ненадежен, как и исследование кровяных шариков под микроскопом, – оно вообще бесполезно, если кровь пролита несколько часов назад. А этот реактив действует одинаково хорошо, свежая ли кровь или нет. Если бы он был открыт раньше, то сотни людей, что сейчас разгуливают на свободе, давно бы уже расплатились за свои преступления.

– Вот как! – пробормотал я.

– Раскрытие преступлений всегда упирается в эту проблему. Человека начинают подозревать в убийстве, быть может, через несколько месяцев после того, как оно совершено. Пересматривают его белье или платье, находят буроватые пятна. Что это: кровь, грязь, ржавчина, фруктовый сок или еще что-нибудь? Вот вопрос, который ставил в тупик многих экспертов, а почему? Потому что не было надежного реактива. Теперь у нас есть реактив Шерлока Холмса, и все затруднениям конец!

Глаза его блестели, он приложил руку к груди и поклонился, словно отвечая на аплодисменты воображаемой толпы.

– Вас можно поздравить, – сказал я, немало изумленный его энтузиазмом…»

Установление присутствия крови в следах на вещественных доказательствах является обязательным условием для последующего определения ее видовой, групповой принадлежности и разрешения других вопросов, связанных с экспертизой крови.

В приведенном выше фрагменте затронут очень важный вопрос для судебной медицины – качественное установление крови. Данная проблема была действительно актуальной во время сэра Артура Конан Дойла. Несмотря на то что проведенная Холмсом реакция не имеет научного обоснования, показана попытка решения актуальной проблемы. В те времена, когда писалась повесть «Этюд в багровых тонах», судебными медиками проводились различные исследования в области судебной гематологии (науки о крови).

В 1848 г. доцент Дерптского университета Карл Шмидт выпустил в свет брошюру под названием «Диагностика подозрительных пятен в уголовных случаях». Эта книжка представляет собой одно из самых первых отдельных руководств по судебно-медицинскому исследованию крови. Она содержит 48 страниц текста, из которых 41 страница посвящена исследованию кровяных пятен и 7 страниц – семенным пятнам. Отдельно приложена большая таблица размеров эритроцитов. Исследование пятен крови делится на четыре раздела: а) физико-химическая характеристика крови; б) характеристика жидкостей, которые могут быть приняты за кровь; с) методы исследования пятен крови; д) полный ход исследования в судебно-медицинских случаях.

Автор разбирал прежние методы и выявлял себя сторонником морфологического метода не только для определения присутствия крови, но и для установления ее вида. Он провел ряд собственных экспериментов, на основании которых решает вопрос для некоторых случаев положительно. Кроме того, Карл Шмидт, как и многие другие авторы этого времени, изучал возможности отличия пятен крови от следов, оставляемых мухами, блохами и клопами, и указывал ряд отличительных признаков. Он пытался также определить вид крови по количественному содержанию железа в крови, но признал этот опыт непригодным для практических надобностей, так как количество железа в крови хотя и различно у разных животных, но подвержено сильным колебаниям в пределах одного и того же вида, особенно у человека.

Работа Карла Шмидта оказала большое влияние на коллег, получив довольно широкую известность; она и цитируется почти всеми авторами, писавшими о морфологических видовых различиях крови. Даже в ХХ столетии мы неоднократно находим ссылки на эту работу.

Современники, в частности профессор Е. В. Пеликан из Медико-хирургической академии (Санкт-Петербург), живо интересовавшийся вопросами судебной гематологии, давали высокую оценку работе Карла Шмидта. Сам же профессор Е. В. Пеликан в 1850 г. публикует оригинальную статью «О затруднениях при исследовании крови».

С полным основанием Е. В. Пеликан указывает, что основным доказательством присутствия крови в подозрительном пятне является обнаружение форменных элементов крови – эритроцитов, или красящего вещества крови.

Следует отметить, что в ту пору исследование пятен крови уже входит в практику судебно-медицинских учреждений. Подобные исследования производились, например, по известному нашумевшему делу видного русского писателя-драматурга А. В. Сухово-Кобылина. Как известно, поводом для создания художественной трилогии этого писателя послужило привлечение А. В. Сухово-Кобылина в 1850 г. к судебному следствию по обвинению в убийстве француженки Симон Деманш. Пьесы Сухово-Кобылина являются обличением существовавшего тогда правосудия, корыстолюбия судей и полицейских властей.

В ХIX столетии в России в Медицинском департаменте уже была предусмотрена должность эксперта по микроскопическим исследованиям, или дословно «чиновника по части микроскопии и естественных наук». В этой должности более 40 лет состоял Н. П. Ивановский, впоследствии профессор Военно-медицинской академии и Женского медицинского института в Санкт-Петербурге. В этот период времени, по данным Мерклина (1865), микроскопические исследования возросли с 217 дел в 1862 г. до 272 дел в 1864 г., что явилось значительным прогрессом по внедрению дополнительных методов исследования в судебной медицине.

В 1870 г. врачебные отделения были снабжены микроскопами и получили право давать окончательные заключения, базируясь на собственных исследованиях. В статистику же Медицинского департамента входили лишь случаи, когда судебно-медицинские органы считали необходимым проверить производственное исследование. Такой порядок сохранялся до самой Октябрьской революции 1917 г.

Е. В. Пеликан (1824–1884)

Г. В. Струве по поручению Медицинского департамента выпустил «Наставление к исследованию подозрительных пятен», которое предназначалось для практического использования. Данное наставление в 1870 г. было переведено на немецкий язык. Эти данные представляются нам очень важными по линии установления наших отечественных приоритетов в области судебной гематологии.

В первом издании «Архива судебной медицины» вышла статья Мерклина (1865) о судебно-медицинском исследовании пятен крови, в котором отражены в основном организационные и общие вопросы. Лучшим способом установления кровяной природы пятен автор считает кристаллический, не исключая при этом и микроскопический метод. Автор акцентирует внимание исследователя на трудностях обнаружения крови в почве, а также на ложных пятнах, похожих на кровь. Применение микрометрического метода видовой дифференциации крови Мерклин считает невозможным в судебно-медицинской практике. В третьем издании (1870 г.) находим краткий реферат о втором издании немецкого руководства Пфаффа, в котором упоминается о спектральном анализе по Валентину, о получении кристаллов гемина по Эрдману, о плеохромизме кристаллов гемина.

В переводном руководстве по судебной медицине Шауенштейна, вышедшем в 1865 г., вопросам исследования крови посвящена лишь незначительная часть. В этом разделе автор констатирует, что «распознавание кровяных пятен давно уже сильно занимает врачей, и обнаруженные по этому поводу труды составляют уже давно обширную специальную отрасль судебно-медицинской литературы». В первую очередь рекомендуется морфологический способ, а при отрицательных результатах его – старые химические методы. Кристаллы гемина «принадлежат к самым существенным обогащениям учения о распознавании кровяных пятен». Здесь же имеется ссылка на спектральные исследования Валентина, которые обещают сделаться «важным орудием для открытия преступления».

В 1866 г. вышла небольшая заметка Радуловича о пробе Ван-Дена. В 1870 г. в переводном руководстве Бухнера приведены исторические сведения и список основной литературы по судебной гематологии. Третий отдел второй главы руководства посвящен исследованию пятен крови. Приводится подробное описание морфологических способов, а также получения кристаллов гемина и их исследования. Говорится о трудностях видовой дифференциации крови, и упоминаются разные варианты этого способа, включая способ Барроюэля. Приводятся данные Фридберга, касающиеся региональных признаков крови, а также определения давности пятен крови по их растворимости. Из сообщения Белевского уездного врача Базилева в этом же году описан случай исследования пятен крови на топоре и рубашке, где были использованы старые химические методы, а также пробу Ван-Дена и геминовая проба по Брюкке – Эрдману, которые дали положительные результаты. Далее хотелось бы отметить работы прозектора Тифлисской городской больницы Малинина, которые появились в «Архиве судебной медицины» в 1871 г. В этих работах автор рекомендует для отмывания эритроцитов использовать реактив, состоящий из одной части виннокаменной кислоты и двух либо трех частей воды. Кроме того, автор упоминает о книге эксперта – химика при Кавказском гражданском медицинском управлении Г. В. Струве – «Наставления к исследованию подозрительных пятен», в которой изучению пятен крови посвящено 47 страниц и 7 цветных таблиц. Автор дает описание кристаллических проб, старых химических реакций, указывает на несовершенство морфологических способов, настоятельно рекомендуя спектральные методы, приводит сведения об изучении пятен с помощью поляризационного микроскопа. Для дифференциации видоспецифического белка крови автор ссылается лишь на несовершенные морфологические пробы. Указано, что впервые в России врач Клейн в Москве в 1866 г. и аптекарь Кох в Харькове в 1867 г. применяли спектроскопический метод исследования пятен, подозрительных на кровь, с помощью которого они обнаруживали красящее вещество крови – гемоглобин. С этого времени спектроскопические исследования входят в практику и, как известно, до настоящего времени являются самыми распространенными методами для установления наличия крови на вещественных доказательствах.

В 1872–1873 гг. вышел перевод обширного немецкого руководства Каспера, который был тщательно и умело переработан, дополнен Мержеевским, Шмелевым и Рудневым. В разделе об исследовании трупов вышла четвертая глава – «Исследование подозрительных пятен», где очень кратко излагаются лишь три метода: морфологический, кристаллический и спектральный.

Автор резко возражает против употребления дистиллированной воды для отмывания эритроцитов, так как при этом наступает гемолиз последних. Указывает, что спектральный метод для открытия спектра оксигемоглобина ненадежен, так как от действия минеральных кислот, едких и углекислых щелочей и от гниения кровь теряет способность давать абсорбционные линии в спектре. Способ Барроюэла автор считает ненаучным, а пробу Ван-Дена очень неточной.

В популярной брошюре Паке «Судебная химия», вышедшей в 1874 г., имеется глава о доказательстве пятен крови, написанная на восьми страницах с рисунками кристаллов. Автор относит кристаллическую пробу к наилучшей и сообщает о трех способах получения кристаллов. Спектральный же анализ считает не столь точным, нежели при получении гемина. При отрицательных результатах рекомендует пробу Ван-Дена. О методе Барроюэля говорит, что «едва ли какой-либо эксперт решится употреблять такое средство». По поводу эритроцитов упоминает немного, считая, что они в пятнах испорчены и не годны для микроскопии.

Профессор фармации Дерптского университета Г. Драгендорф много уделял внимания вопросам исследования крови; известен его способ установления давности образования пятен крови. В 1877 г. профессором Медико-хирургической академии Ю. К. Траппом дано другое оригинальное руководство по судебной химии, написанное по поручению Медицинского департамента. Положительная оценка этого труда была дана великим отечественным химиком Д. И. Менделеевым, который серьезно интересовался вопросами судебной химии. Профессора Ю. К. Траппа тоже занимали вопросы судебно-медицинской гематологии, и он поместил ряд рефератов по судебно-медицинскому исследованию крови в «Военно-медицинском журнале».

На кафедре судебной медицины Медико-хирургической академии в Санкт-Петербурге, руководимой с 1871 г. профессором И. М. Сорокиным, уделялось определенное внимание исследованиям крови, о чем свидетельствует более поздняя деятельность учеников этой кафедры Д. П. Косоротова и Ф. А. Потенко. Однако в 1868 г. данная кафедра дала лишь одну работу о крови, которая была напечатана в «Протоколах русских врачей». В этой работе приводятся различные аспекты исследования крови применительно к судебно-медицинской практике.

В своих экспериментах профессор И. М. Сорокин доказывает, что амиловый спирт хорошо растворяет форменные элементы крови с образованием кристаллов. Указывает, что окись углерода длительное время остается в крови трупа и может быть обнаружена соответствующими реактивами; приводит сведения, что действие этилового спирта не меняет физических свойств крови, поэтому нельзя судить об отравлении алкоголем по свойствам крови трупа.

Программа кафедры включала в себя два пункта: «Исследование следов кровяных отпечатков; исследование кровяных пятен». В 1878 г. профессор И. М. Сорокин писал, что в академии «профессор упражняет студентов в производстве судебно-медицинских вскрытий и в исследовании кровяных и других пятен».

Определенное внимание судебно-гематологическим вопросам стало уделяться и на Казанской кафедре судебной медицины. Например, еще в 1886 г. появилось сообщение профессора И. М. Гвоздева о получении кристаллов гемина. В журнале «Медицинский вестник» за 1876 г. находим сообщение о том, что от имени профессора И. М. Гвоздева были сделаны два сообщения: об исследовании крови на снегу при помощи консервирования их пикриновой кислотой и о работе студента Гонева, который провел проверку способа Малинина с 32-процентным едким калием для определения видовой принадлежности крови. Однако следует отметить, что работы профессора И. М. Гвоздева не обратили на себя должного внимания судебных медиков, так как были напечатаны в малодоступных широкому кругу специалистов в области судебной медицины изданиях. Более известными стали судебно-гематологические работы Малинина и Г. В. Струве. В частности, сообщения Малинина были напечатаны в «Архиве судебной медицины» в 1871 и 1874 гг.

Следует особенно отметить работу Г. В. Струве об установлении наличия крови по спектру гематопорфирина, опубликованную на немецком языке в «Бюллетене Санкт-Петербургской Академии наук». Но, надо полагать, что русские и зарубежные судебные медики никогда этот «Бюллетень» не читали, поэтому гематопорфириновая проба носит имя не Г. В. Струве, что было бы совершенно справедливым, а Хаммерля – Краттера, сообщивших о ней на несколько лет позже.

Только в ХХ столетии в трудах С. П. Вертоградова и Н. С. Бокариуса имеются указания на заслуги Г. В. Струве.

Профессор Н. В. Попов в аннотации к своей монографии по судебной гематологии пишет: «Другие работы Струве, к сожалению, печатались в малодоступных или не читаемых судебными медиками изданиях. Например, интересные работы Струве, среди которых есть сообщение об открытии крови по спектру гематопорфирина, были помещены в весьма почтенном органе – «Бюллетене Петербургской Академии наук» и даже на немецком языке. Но судебные медики – и русские, и заграничные – никогда этого «Бюллетеня» не читали, и поэтому гематопорфириновая проба носит имя не Струве, как она того заслуживает по справедливости, а имя Хаммерля – Краттера, писавших о ней на несколько лет позже… Он же в 1876 году в том же бюллетене писал о спектре гемохромогена как наиболее удобного и чувствительного для обнаружения крови».

Далее следует отметить очень важное для судебной медицины событие – выход учебника Э. Гофмана под редакцией И. М. Сорокина. Этот учебник выдержал много русских изданий (1880, 1887, 1891, 1901, 1908, 1912, 1933) и служил настольной книгой для многих поколений отечественных судебных медиков. В отделе «Насильственные повреждения здоровья и насильственная смерть» имелись сведения об исследовании крови. Описаны морфологические, кристаллические и спектральные методы. Отмечены работы Г. В. Струве об эритроцитах, но даже в более поздних изданиях нет указаний о применении гематопорфириновой пробы Г. В. Струве. В учебнике за 1891 г. приводится проба на «восстановленный гематин», «которая дает результаты даже тогда, когда не удается уже получить спектра оксигемоглобина». Автор считает, что в случае, когда исследуемые пятна очень малы, нужно сразу проводить пробу на восстановленный гематин.

В переводном учебнике Корнфельда за 1885 г. имеется третья глава – «Исследования предметов, пятен, следов оружия и др.». Более 10 страниц посвящено исследованию крови. Автор указывает, что «распознавание крови является одним из триумфов медицины и служит особенно благодатной почвой для судебного врачебноведения». Приводятся все известные в то время пробы, особенно морфологические, а также спектральные – в основном на оксигемоглобин. Говорится о гематине и лишь немного – о «восстановленном гематине», хотя нет расшифровки его значения и способа получения. Не придается значения пробе Ван-Дена, описаны пробы на получение кристаллов гемина.

В изданиях Е. С. Варшавского (1891), литографированного курса профессора В. А. Легонина (1896) имеющиеся разделы об исследовании крови изложены очень кратко, так как эти руководства предназначены для юристов. В судебно-медицинском отношении подробное исследование крови написано Э. Гофманом и Ю. Краттером, и изложено в «Реальной энциклопедии медицинских наук» Эйденбурга, которая вышла в начале 90-х гг. ХХ в. в русском переводе под редакцией профессора М. И. Афанасьева.

Развернуто представлены аспекты исследования крови в известном «Пособнике» профессора Н. А. Облонского, вышедшем в 1894 г. Это издание пользовалось большим авторитетом среди судебных медиков и носило характер практического руководства. К сожалению, данное руководство быстро стало библиографической редкостью. В «Пособнике» говорится об описании внешних признаков пятен крови, приводится морфологический и спектральный методы установления наличия крови, сообщается об отличии следов, возникших при раздавливании насекомых, от ржавчины и красок. Спектральные пробы рекомендуются на оксигемоглобин, метгемоглобин в старых пятнах. Есть упоминание и о восстановленном гематине.

Кровь, подвергшуюся действию высокой температуры, по мнению автора, следует исследовать на спектр гематопорфирина при помощи предварительной обработки концентрированной серной кислотой. Глава, посвященная крови, в «Пособнике» Н. А. Облонского состоит из 18 страниц и указывает на хорошую эрудицию и большой опыт автора.

Среди многих работ в области судебной медицины, вышедших с кафедры Военно-медицинской академии за два последних десятилетия XIX столетия, найдена только одна судебно-медицинская работа Д. П. Косоротова (1889), в которой автор выходит за пределы исследования пятен и расширяет спектр применения обычных проб на кровь.

В 1891 г. профессора И. М. Сорокина сменил Н. П. Ивановский, имевший многолетний опыт чиновника – эксперта Медицинского департамента. Несмотря на то что Н. П. Ивановский прекрасно разбирался в вопросах судебно-медицинского исследования крови, среди научных работ, изданных за время его заведования кафедрой (1891–1889), нет ни одной чисто судебно-гематологической работы. Но все же профессор Н. П. Ивановский вопросам гематологии уделял большое внимание в своей практической деятельности, которая отразилась даже в литературе – в рассказе А. П. Чехова и учебной работе.

По свидетельству А. К. Европина: «При лекциях об исследовании различных подозрительных пятен весьма подробно обращалось внимание на исследование таковых химико-микроскопически и спектроскопически».

В Императорском Московском университете при профессоре И. И. Нейдинге, сменившем Д. Е. Мина в 1878 г. и занимавшем кафедру до 1900 г., работ по исследованию вещественных доказательств не велось. Все началось только с очень известной диссертации П. А. Минакова о волосах (1894) и продолжалось рядом работ по лабораторным вопросам изучения крови. Первая работа судебно-гематологического характера принадлежит также П. А. Минакову, но касается не пятен крови, а изучению влияния формальдегида на гемоглобин, кроме того, в этой работе впервые приводится предположение о нейтральном гематине.

В 1897 г. вышла небольшая, но выдающаяся работа П. А. Минакова «О действии на кровь и гемоглобин формалина и алкоголя». Эта работа была опубликована на русском языке в «Медицинском обозрении» (1897). В ней П. А. Минаков приводит результаты своих химических и спектроскопических исследований крови, измененной под влиянием алкоголя и формалина. Работа эта была вызвана известным открытием Н. Ф. Мельникова-Разведенкова нового способа консервирования патолого-анатомических препаратов с сохранением их натурального цвета при помощи формалина и спирта.

П. А. Минаков обратил внимание, что цвет крови в патолого-анатомических препаратах не вполне натуральный, а имеет кирпичный оттенок. Данный факт зависит, по исследованиям П. А. Минакова, от того, что под влиянием формалина и спирта гемоглобин переходит в нейтральный гематин, не растворимый в воде и спирте и дающий особый спектр, до того времени никем не наблюдавшийся. С этой же точки зрения П. А. Минаков объяснил ошибки, встречающиеся при изготовлении препаратов по способу Н. Ф. Мельникова-Разведенкова. Сделанное П. А. Минаковым открытие нейтрального гематина и его спектра составило важный новый факт в науке. Два года спустя Арнольд описал спектр нейтрального гематина, идентичный открытому П. А. Минаковым.

Для установления присутствия крови в следах на вещественных доказательствах методы делятся на ориентировочные и доказательные.

К наиболее часто используемым в настоящее время ориентировочным методам относят реакцию с реактивом Воскобойникова (с бензидином). Марлевый или ватный тампон смачивают смесью, состоящей из 1 процентного спиртового раствора основного бензидина и 5 процентного раствора перекиси водорода, и прикладывают к пятну, похожему на кровь. В случае наличия крови реактив на вате (марле) в месте соприкосновения приобретает синий цвет.

Для установления присутствия крови в следах на различных загрязненных предметах, больших по объему (ковры, половики и т. п.), особенно когда они располагаются в менее освещенных участках места происшествия, используют реакцию хемилюминесценции. В 1 л дистиллированной воды вносят 0,1 г люминола и 0,5 г гидрокарбоната натрия. Перед использованием к раствору добавляют пергидроль из расчета 10 мл на 1 л раствора. Подозрительные участки опрыскивают из пульверизатора. При положительном результате наблюдают вспышку голубого цвета в течение 65 с и образование белой пены.

Из доказательных методов кровяного происхождения следа для хорошо выраженных пятен применяют (по выбору) метод микроспектроскопии или (чаще всего) метод тонкослойной хроматографии на различных сорбентах, для чего кусочек из следа экстрагируют в физиологическом растворе, затем наносят подготовленный материал на сорбент в 5–7 мм от левого края пластинки, которую подсушивают при комнатной температуре. На образовавшееся пятно наносят вторую каплю, подсушивают – и так до израсходования 1–2 мкл вытяжки. Таким же образом на пластинку наносят свидетель (заведомо известную кровь). Пластинку помещают на 15 мин в сушильный шкаф при 100 градусах С, затем в чашку Петри наливают растворитель и пластинку кладут на подставку так, чтобы фитиль достиг дна чашки, накрывают крышкой и разделение ведут обычно 7–10 мин. Далее пластинку вынимают из камеры, высушивают и опрыскивают верхнюю треть раствором бензидина. Спустя 3–5 мин производят опрыскивание части пластинки раствором перекиси водорода. Образование на хроматограмме недалеко от фронта зоны синего цвета говорит о наличии гемоглобина, которое доказывают, сопоставляя эту зону с зоной свидетеля.

Старые, замытые пятна исследуют следующим образом: из пятна на предмете-носителе берут волокно или делают соскоб, помещают на предметное стекло и добавляют 2–3 капли концентрированной серной кислоты, накрывают предметным стеклом и исследуют довольно чувствительным методом микролюминесценции. Под действием серной кислоты красящее вещество крови образует глыбки гематопорфирина, имеющие яркое пурпурно-красное свечение. Такие участки исследуют с помощью микроспектральной насадки для установления спектра гематопорфирина.

Установив кровь, приступают к следующему этапу исследования – определению видовой принадлежности крови. К основным, постоянно используемым методам в практике относятся метод кольцепреципитации в жидкой среде и метод встречного иммуноэлектрофореза (электропреципитации).

Подготовка объектов для обоих методов практически идентична. Пятна крови на вещественных доказательствах и контрольные участки предметов-носителей экстрагируют стерильным физиологическим раствором при температуре +4–6 °C в течение 18–72 часов. При изучении труднорастворимых пятен крови время экстрагирования продлевают до 4–5 суток. Белки в пятнах из следов крови или другого объекта доводят до приблизительного содержания 1:1000 под контролем пробы Геллера с азотной кислотой.

При работе с пятнами малых размеров в реакции электропреципитации можно использовать ниточки из пятен крови размерами 0,1 × 0,1 см.

Постановка реакции преципитации в жидкой среде: в конические пробирки с соответствующими надписями помещают вытяжки из пятен крови, антиген и изотонический раствор натрия хлорида. В каждый объект исследования наслаивают преципитирующую сыворотку, чтобы отношение антигена и антитела составляло 1:10. Наблюдение ведут в течение часа, отмечая время появления преципитата. Положительным результатом реакции считается выпадение колец преципитата в пробирках с вытяжками из пятен крови и в пробирках с антигенами при отсутствии таковых в пробирках с вытяжками из предмета-носителя и физиологического раствора.

Техника проведения реакции электропреципитации заключается в следующем: расплавленный 1-процентный агаровый гель выливают на стеклянную пластинку, равномерно распределяя по всей площади, охлаждают, дают подсохнуть и уплотниться в течение 10–15 мин. Далее в геле пробивают стандартным пробойником по два параллельных ряда отверстий диаметром 0,3 см по трафарету, расположенному под пластинкой. Гель из отверстий удаляют препаровальной иглой. В отверстия одного ряда помещают преципитирующие сыворотки, в отверстия второго ряда – вытяжки из следов крови или ниточки с кровью. Таким же образом вводят контрольные участки предметов-носителей.

Положительный результат электропреципитации с одной сывороткой контролируют отрицательным результатом с двумя другими преципитирующими сыворотками. При отрицательном результате со всеми вышеуказанными сыворотками реакцию проводят дополнительно с другими преципитирующими сыворотками. Разделение исследуемых объектов производят на универсальном приборе для электрофореза при напряжении 250–300 V, силе тока 30–32 мА и комнатной температуре в течение 20–35 мин. Пластину сохраняют во влажной камере и результаты учитывают в течение суток.

Следующий этап работы эксперта – это определение групповой принадлежности крови. Обычно начинают с последовательного исследования образцов крови проходящих по делу лиц по системе АВО, присланных в жидком или высушенном виде на (марле).

Исследование образцов жидкой крови проходящих по делу лиц по системе АВО в судебно-медицинской экспертизе мало чем отличается от исследования таковой в клинике. Принцип исследования следующий: эритроциты изучаемой крови испытываются стандартными группоспецифическими сыворотками анти-А и анти-В. Сыворотка крови исследуется со стандартными эритроцитами группы А и В. В итоге группоспецифические сыворотки открывают искомые антигены, а стандартные эритроциты – соответствующие агглютинины. Далее приступают к определению групповой принадлежности следов крови на вещественных доказательствах по системе АВО, чаще всего используя реакцию абсорбции-элюции (РАЭ). Суть этого метода заключается в следующем: в первой фазе реакции-абсорбции к пятну крови добавляют стандартную группоспецифическую сыворотку. Агглютинины этой сыворотки абсорбируются соответствующим антигеном крови. Потом охлажденным физиологическим раствором проводят отмывание в целях удаления свободных неабсорбированных антител. При этом не нарушается возникшая взаимосвязь антигена пятна крови с антителами. Во второй фазе реакции абсорбции-элюции производят разделение образовавшегося комплекса «антиген-антитело» путем нагревания, в результате которого происходит разрушение связи антигена с антителами и, соответственно, выход абсорбированных ранее антител в соответствующую жидкую среду. Характер элюированных антител устанавливают по агглютинации в препаратах с контрольными участками предметов-носителей. Допустим, агглютинация стандартных эритроцитов группы В (при отсутствии агглютинации стандартных эритроцитов группы А) говорит, что в исследуемом объекте (пятне крови) имеется антиген В и отсутствует антиген А. В настоящее время для определения антигенов системы АВО гораздо реже используют реакцию абсорбции в количественной модификации и еще реже – реакцию смешанной агглютинации.

Учитывая, что диагноз группы крови ставится в первую очередь на основании выявленных антигенов, определение антител (агглютининов) является дополнительным методом, но, при достаточных размерах пятна, всегда обязательным. Наиболее распространенным является метод покровного стекла по Ляттесу. Суть метода в следующем: кусочки из пятна крови помещаются на 3 предметных стекла, слева – буква «А», справа – буква «В», на третьем стекле – букв

а «О». Далее к каждому кусочку добавляют по несколько капель стандартных эритроцитов соответственно надписи на стеклах групп А, В, О. Препараты помещаются во влажные камеры. Исследование проводят под микроскопом каждые 15–30 мин до подсыхания препарата. Например, при встрече агглютинина с одноименным агглютиногеном эритроцитов (анти-А с А) происходит склеивание (агглютинация) последних. При разноименных агглютинине и агглютиногене эритроцитов (например, анти-А и В) последние остаются свободными. Чтобы исключить ложную агглютинацию, в реакцию вводят эритроциты группы О, которые при истинной агглютинации всегда остаются несклеенными.

В случае если исследуемых лиц, одногруппна по системе АВО, эксперт обязан провести дифференцирование следов крови по другим эритроцитам (MNSs, резус, Lewis, Рр) либо сывороточным (eJm, Нр) системам. Способы выявления групповых факторов по данным системам известны – это реакции абсорбции-элюции, абсорбции-ингибиции, торможения агглютинации, а также электрофоретические методики.